real-time PCR 的操作具体步骤和引物设计 [复制链接]

如题.谁有real-time PCR 的操作具体步骤宝典,麻烦发给我.
doctor_zhaoy@yahoo.com.cn
引物设计是否有特殊之处,怎么设计.麻烦高人指教.谢谢.

1.你在哪个实验室做，用什么样的机器？
2.引物设计一般都找公司完成，小日本TAKARA的不错，还免费

请教一下,设计引物时酶切位点前加哪种保护性碱基有什么原则没?
我查了一下,有的说是随机的,有的说跟原序列相同或者互补
还有人按http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/cleavage_olignucleotides.asp提供的信息加的
不知道你们都是怎么样弄的?
望不吝赐教