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． 体液免疫功能检测 – 抗体制备和检测 – 未知抗原或抗体的体外检测 ． 细胞免疫功能检测 – PBMC的分离、扩增 凝集反应： 定义：颗粒性抗原+相应抗体——可见的凝集团块 分类：直接凝集反应：玻片凝集 定性 试管凝集 半定量 定量抗原+系列稀释抗体——不同程度的凝集反应——确定抗体滴度 间接凝集反应：可溶性抗原+致敏颗粒+相应抗体——可见的凝集团块 注意： Ø 标记试管 Ø 正确使用滴管 Ø 彻底混匀 Ø 温度: 56℃ Ø 记录时间 Ø 轻拿试管，观察结果，首先观察对照管 琼脂扩散实验： 定义：可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例下形成沉淀线或沉淀环。 分类：单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 定量实验 双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 定性实验 注意：琼脂板一定平整、光滑 (无气泡). 琼脂不可过厚 孔中液体不可过满 体外抗体形成细胞检测——QHS (Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination )定量溶血的分光光度检测 原理：取SRBC免疫的小鼠脾脏细胞—— +SRBC+Complement —— 溶血——通过分光光度计定量检测 注意： Ø 新鲜SRBC Ø 保持脾细胞活性 溶血素的收集和溶血素单位的滴定 原理：抗原与抗体结合，暴露抗体上抗原结合位点——Ag+Ab+C——补体活化——靶细胞裂解
酶联免疫吸附试验（ELISA) 定义：用酶标记抗原或抗体检测液体（血液、细胞液）中未知抗体或抗原的方法。 分类： Ø 间接法（Indirect ELISA）： ． 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗 ． 检测液相中未知抗体 Ø 双抗体夹心法（Sandwich ELISA)： ． 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗 ． 检测液相中的可溶性抗原 Ø 竞争法（Competitive ELISA) ： ． 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体 ． 检测液相中的可溶性抗原或抗体 间接法测定溶血素 ——定性检测 注意事项： ． 洗涤彻底，避免交叉污染。 ． 按顺序加样，孔底无气泡。 ． 包被和温育在湿盒内进行。 补体结合反应（Complement fixation Test, CFT） 定义：是指在补体的参与下，以绵羊红细胞（SRBC）和溶血素（抗SRBC的抗体）作为指示系统的抗原抗体反应。 原理：补反中包括两个系统五种成分： u 待检系统：已知Ag或Ab、待检Ab或Ag及仅供一组Ag-Ab系统反应的定量补体。 u 指示系统：绵羊红细胞和溶血素。 注意事项： ． 绵羊红细胞用前应轻晃混匀，不可剧烈震荡。 ． 各种试剂的吸管不可混用。 细胞免疫功能检测 特异性细胞免疫是由T细胞介导的，因此，细胞免疫检测通常是检查T细胞的数量、功能及其产物如细胞因子等，是了解机体细胞免疫状态的重要手段。
1.外周血单个核细胞的分离 原理：外周血+淋巴细胞分离液离心分层 淋巴细胞 单核细胞 1.070g/l 分离液 (1.077±0.002g/l) 粒细胞和红细胞 (1.092g/l) 注意： ． 无菌操作. ． 注意血制品污染. ． 控制操作时间，保持细胞存活. ． 应用水平离心机. 2.E－花环形成实验 人类T淋巴细胞表面CD2分子是绵羊红细胞（SRBC）受体，也称E受体，在一定条件下，SRBC环绕T细胞与之结合，形成花环状，称E花环（E-rosette），形成此种花环的细胞称E花环形成细胞（简称E-RFC）。
3.淋巴细胞转化实验 T细胞在体外培养时，当受到非特异性的有丝分裂原（PHA）刺激后可转化为淋巴母细胞，并进行有丝分裂，转化的淋巴母细胞，在形态上出现了幼稚化，光镜下很容易识别，可通过淋巴细胞转化率反映机体T细胞免疫功能。此试验也可用3H-TdR掺入法或MTT法定量检测。
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