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<求助>全血DNA提取的方法????? [复制链接]

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离线aspilin
 
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只看楼主 倒序阅读 使用道具 0楼 发表于: 2007-04-15
想用试剂盒提取全血的DNA,但不知道该怎么做,请问哪位师兄师姐有相关的经验??告诉我步骤好吗?我想用天根的DNA试剂盒,谢谢....[p:5]
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只看该作者 1楼 发表于: 2007-04-15
引用第0楼aspilin2007-04-15 14:54发表的: 想用试剂盒提取全血的DNA,但不知道该怎么做,请问哪位师兄师姐有相关的经验??告诉我步骤好吗?我想用天根的DNA试剂盒,谢谢....[p:5]


百度啊,google 阿,都可以的。很方便
求助之前,先查查相关的资料,实在没办法了,再来求助。。。。
离线aspilin
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只看该作者 2楼 发表于: 2007-04-15
呵呵,我自己正在找呢,找个懂的学长可以问问问题啊,呵呵,
离线merck
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只看该作者 3楼 发表于: 2007-04-15
1条评分
aspilin 鲜花 +1 - 2007-04-15
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只看该作者 4楼 发表于: 2007-04-15
无水乙醇提取全血细胞DNA1、取2毫升外周静脉血,加入ACD抗凝剂100微升,混合均匀。血液尽量新鲜,在冰箱内存放不要超过5天,以保证DNA分子的完整性------制备抗凝血

2、加300微升抗凝血于1.5毫升ep管中。加入900微升红细胞裂解液,反复颠倒混合均匀,室温放置10分钟,其间再颠倒3-5次----将充分红细胞裂解。为后面分离有核细胞做准备。

3、室温15000转离心20秒,使有核细胞沉淀ep管底部。----红细胞由于裂解后变轻,经离心后会进入上清液。

4、吸去上清液,加红细胞裂解液900微升,混合均匀,重复离心,弃上清。---使红细胞残留彻底与有核细胞分离

5、加30微升的红细胞裂解液将白细胞制成制成细胞悬液。-----将白细胞团打散为后面的裂解做准备。

6、加300微升的白细胞裂解液,充分混合均匀。室温下放置10分钟,直至白细胞完全裂解(溶液变粘稠)---其中主要是蛋白质的缘故。

7、加入100微升蛋白沉淀液,强力震荡使之充分混合均匀。---是蛋白质沉淀

8、15000转载离心机中10分钟,蛋白质沉到ep管的底部形成紧密地深棕色斑块。---分离蛋白质,其他成分进入上清液

9、将上清液移至另一新的1.5ml ep管中,加入900微升预冷无水乙醇,放置3分钟,然后反复轻轻颠倒ep管,直至DNA沉淀完全析出。-----关键步骤。注意加无水乙醇时要掌握好方法,使无水乙醇与上清液形成一个界面。在界面冒气泡上形成丝状物后,在轻摇,力度太大会将DNA晃散。

10(a)再次离心5分钟,将DNA沉底到管壁,倒掉液体后,用70%酒精进行清洗,去除高盐。倒掉酒精后用50微升的te液固定。4摄氏度冰箱保存备用。

10(b)可以用玻璃钩将DNA勾出后用70%酒精进行清洗团块,晾干后加入到50微升的te液进行固定,4摄氏度冰箱保存备用。

  注意:实验的关键步骤是第9步。此方法比氯仿异戊醇提取麻烦,但适合用于高质量要求的DNA提取.
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merck 鲜花 +1 - 2007-04-15
aspilin 鲜花 +1 - 2007-04-15
诸葛笨笨 鲜花 +1 - 2007-04-15
离线aspilin
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只看该作者 5楼 发表于: 2007-04-15
引用第4楼麦穗和稻谷2007-04-15 15:13发表的:无水乙醇提取全血细胞DNA1、取2毫升外周静脉血,加入ACD抗凝剂100微升,混合均匀。血液尽量新鲜,在冰箱内存放不要超过5天,以保证DNA分子的完整性------制备抗凝血2、加300微升抗凝血于1.5毫升ep管中。加入900微升红细胞裂解液,反复颠倒混合均匀,室温放置10分钟,其间再颠倒3-5次----将充分红细胞裂解。为后面分离有核细胞做准备。3、室温15000转离心20秒,使有核细胞沉淀ep管底部。----红细胞由于裂解后变轻,经离心后会进入上清液。.......


这个跟遗传学实验上的步骤查不多啊,呵呵,谢谢
离线aspilin
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只看该作者 6楼 发表于: 2007-04-15
谢谢楼上的两位战友,呵呵
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