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[做实验]求助：大提质粒 [复制链接]

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离线医生何求
渐入佳境
 
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只看楼主 倒序阅读 使用道具 0楼 发表于: 2008-09-19
各位同仁。本人基础方面不大懂，请教

现有含目的基因片段的质粒（由公司合成），-20°保存。。我现在想扩增，用碱裂解法大提质粒，请教各位方法。
请好心人加QQ82602515，加时请写“大提质粒”
谢谢。
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离线bear1991
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只看该作者 1楼 发表于: 2008-09-19
导入感受态细菌（如DH5α,JM109）后，加入LB液体培养基200转摇菌1小时
之后取50---100μl涂布于LA平板培养16---24小时，再挑单克隆菌斑提取

我们做实验是这么做的，不知道适合您不？
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654-2 鲜花 +1 2008-09-19
医生何求 鲜花 +1 2008-09-19
云天外 鲜花 +1 2008-09-19
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离线霍普金斯
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只看该作者 2楼 发表于: 2008-09-20
引用第1楼bear1991于2008-09-19 12:14发表的  :导入感受态细菌（如DH5α,JM109）后，加入LB液体培养基200转摇菌1小时之后取50---100μl涂布于LA平板培养16---24小时，再挑单克隆菌斑提取我们做实验是这么做的，不知道适合您不？ [表情]

要看是什么耐药了，LA或者LK。。。。。
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医生何求 鲜花 +1 2008-09-20
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离线医生何求
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只看该作者 3楼 发表于: 2008-09-21
引用第1楼bear1991于2008-09-19 12:14发表的  :导入感受态细菌（如DH5α,JM109）后，加入LB液体培养基200转摇菌1小时之后取50---100μl涂布于LA平板培养16---24小时，再挑单克隆菌斑提取我们做实验是这么做的，不知道适合您不？ [表情]

那加入LB培养液的时候，抗生素是临时加是吧，那抗生素就是加质粒上有的抗性的抗生素吧。?
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离线bear1991
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只看该作者 4楼 发表于: 2008-09-21
引用第3楼医生何求于2008-09-21 08:43发表的  :那加入LB培养液的时候，抗生素是临时加是吧，那抗生素就是加质粒上有的抗性的抗生素吧。?

在LB中是为了让感受态细菌表达新转进去的质粒的抗性的，没加抗生素
涂板上抗生素是要在灌板前就加入的
对头，加入的抗生素就是你所用的载体质粒上含有的抗性基因
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医生何求 鲜花 +1 2008-09-21
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离线医生何求
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只看该作者 5楼 发表于: 2008-09-22
引用第4楼bear1991于2008-09-21 17:52发表的  :在LB中是为了让感受态细菌表达新转进去的质粒的抗性的，没加抗生素涂板上抗生素是要在灌板前就加入的对头，加入的抗生素就是你所用的载体质粒上含有的抗性基因

多谢，我不会送花，怎么弄
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