实验一、邻甲苯胺法测血糖含量
室温：16°
<实验目的> 1、掌握邻甲苯胺血糖测定法的基本原理及操作方法
2、熟悉邻甲苯胺血糖测定法的影响因素及控制方法
3、了解邻甲苯胺血糖测定法的临床意义及应用
<实验原理> 1、葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻-甲苯胺缩合产生蓝绿色的席弗碱
2、颜色的深浅与葡萄糖含量成正比，可通过比色法测得血糖含量。
<实验步骤及结果>
1、取大试管3支，编号，按下表加入试剂
试剂（ml） 测定管 标准管 空白管
血浆 0.1 - -
糖标准（1mg/ml） - 0.1 -
蒸馏水 - - 0.1
邻甲苯胺试剂 4.0 4.0 4.0
2、混合各管后,置沸水浴中加热10分钟取出，流水冷却。
3、用630nm波长进行比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
4、计算
注射前 注射后 标准管
0.481 0.156 0.462
5、实验数据
通过结果可知兔子在注射前的血糖含量是5.8mmol/L，注射后的血糖含量是1.9mmol/L。
实验二、糖酵解中间产物的鉴定 室温：16°
<实验目的>
1、掌握糖酵解的主要中间步骤及其产物
2、熟悉利用抑制剂来研究中间代谢的方法
<实验原理>
1、利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。
2、硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。
3、2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。
<实验步骤>
1、 酵母混悬液制备，取新鲜酵母约1g置于烧杯中，加入5%葡萄糖溶液50ml，用玻璃棒搅拌，使成均匀的混悬液，备用。
2、 取三支试管，编号。
试剂（ml） 管号
1 2 3
pH7.4磷酸盐缓冲液 2.0 2.0 2.0
一碘乙酸 0.5 0.5 ---
硫酸肼 0.5 0.5 ---
10%CCl3COOH溶液 1.0 --- ---
酵母液 4.0 4.0 4.0
蒸馏水 --- 1.0 2.0
混匀，在37°恒温水浴中保温60min
一碘乙酸 --- --- 0.5
硫酸肼 --- --- 0.5
10%CCl3COOH溶液 --- 1.0 1.0
蒸馏水 2.0 1.0 ---
混匀，静置10min，3000r/min，离心10min，再取试管，对号操作
上清液 0.5 0.5 0.5
1mol/L NaOH溶液 0.5 0.5 0.5
混匀，室温放置10min
2，4-二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5
1mol/L NaOH溶液 3.5 3.5 3.5
<实验结果>
实验三、酶法测定血清中胆固醇含量
室温：16°
<实验目的>
1、掌握血清胆固醇测定的临床意义
2、了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理
<实验原理>
1、 血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。
2、 本实验是胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。
3、 血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸 (FFA) 。
4、 胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。
5、 H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。
<实验步骤>
1、标本。不容血的血清和血浆标本。
2、取三支试管，编号。
加入物 测定管 标准管 空白管
血清 10 --- ---
胆固醇标准液 --- 10 ---
蒸馏水 --- --- 10
酶应用液 1000 1000 1000
混匀后，37°水浴保温15min，在500nm波长处比色，以空白管凋零，读取各管吸光度。
3、 计算 血清TC (mmol/L)＝ 标准管吸光度/测定管吸光度×胆固醇标准液浓度
<实验结果>
试管 测定管 标准管 空白管
数据 0.286 0.304 0
代入公式得到胆固醇含量为5.49mmol/L
实验分析
首先说邻甲苯胺法测血糖含量，它具有操作简单,特异性较高的优点, 试剂成本也较低, 目前在教学实验或规模较小的基层医院用于测定血糖。但该法一般在浓酸高温条件下发生反应, 因此在做血糖测定时须多加注意。这一个实验最最重要的也就是浓酸了，不过，在老师的指导下，我们做的还是比较顺利的。
之后是糖酵解中间产物的测定实验，在这个实验中，我们不仅了解到了碘乙酸的抑制剂作用，还知道了在糖酵解的分解循环中，中间产物有3-磷酸甘油醛。我们的实验并不是完全按着实验操作进行的，在老师的指导下，我们先是水浴30min，离心后加碱的溶液没有静置直接就进行实验，但是没有颜色区别。于是我选择在加碱性溶液之后静置10min，最后，我们得到了想要的结果。我思考了一下静置10min怎么就这么重要，是因为这是一个有生物活性物质参加的反应，它在进行反应的时候是需要足够时间的。
最后的实验是酶法测定胆固醇含量，这个实验中标准液吸取后应立即上盖，以防水分挥发 。液体混浊或有絮状物视为失效本法特异性高，维生素C，谷胱甘肽，左旋多巴引起负偏差。
