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[做实验]有熟悉HE染色的吗?求帮忙 [复制链接]

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离线小旦
 
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只看楼主 倒序阅读 使用道具 0楼 发表于: 2013-02-02
RT,有还在学校里会HE染色的同学吗?LZ需要做HE染色,按丁香园里查的步骤试了两次,染的都不好。真心求帮助,我的手机号是15863191124。

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只看该作者 1楼 发表于: 2013-02-02
你效果不好指的是什么?核颜色太浅还是浆太红,还是?

楼主留言:

我染的是神经冷冻切片,9μm,染出来看不到施万细胞核,,,而且老是有些黑乎乎的杂质,,其实说白了,,,是我做得特别业余,染得乱七八糟的。。。
我在网上搜到的HE染色的常规方法:
(1)冷冻切片固定 10~30 s
(2)稍水洗 1~2 s
(3)苏木精液染色(60℃) 30~60 s
(4)流水洗去苏木精液 5~10 s
(5)1%盐酸乙醇 1~3 s
(6)稍水洗 1~2 s
(7)促蓝液返蓝 5~10 s
(8)流水冲洗 15~30 s
(9)0.5%曙红液染色 30~60 s
(10)蒸馏水稍洗 1

1条评分鲜花+1
小旦 鲜花 +1 - 2013-02-06
离线wwzhang
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只看该作者 2楼 发表于: 2013-02-03
1冷冻切片
2酒精固定2-3s
3流水冲洗6-7s(把切片插在染色架上,把染色架放在烧杯里,用烧杯接水,不要让水流直接冲在组织上)
4苏木素染色(因为配制方法不同,时间自己摸,我自己配的苏木素染3min)(一般都室温染色,没听说过用60°的。)
5流水洗4-5秒
61%盐酸酒精2-3s
7自来水流水返蓝(因为自来水偏碱性用自来水返蓝就可以)我的返蓝时间1min效果很
80.5%伊红(我用醇溶性的 ,染色时间10s)
9流水稍洗
10 依次过从低到高梯度酒精75%(2-3s)、80%(1min)、90%(1min)、95% (1min) 100%(2min)(我的酒精第一缸是75%在低浓度酒精中不能时间太长,否则会把伊红脱完),二甲苯各一分钟。
11中性树胶封片。
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小旦 鲜花 +2 灰常感谢! 2013-02-06
离线小旦
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只看该作者 3楼 发表于: 2013-02-05
回 wwzhang 的帖子
wwzhang:1冷冻切片2酒精固定2-3s3流水冲洗6-7s(把切片插在染色架上,把染色架放在烧杯里,用烧杯接水,不要让水流直接冲在组织上)4苏木素染色(因为配制方法不同,时间自己摸,我自己配的苏木素染3min)(一般都室温染色,没听说过用60°的。)5流水洗4-5秒....... (2013-02-03 18:17) 

冷冻切片是直接贴片的吗?怎样用酒精固定?是下行浓度梯度吗?
中性树胶封片前二甲苯要不要晾干?要先观察一下再封片吗?
离线wwzhang
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只看该作者 4楼 发表于: 2013-03-12
回 小旦 的帖子
小旦:冷冻切片是直接贴片的吗?怎样用酒精固定?是下行浓度梯度吗?中性树胶封片前二甲苯要不要晾干?要先观察一下再封片吗? (2013-02-05 10:48) 

是,浸一下95%酒精固定2-3s,不用,晾干再封片二甲苯味会小一点,不用观察了,不封片在镜下看也看不清楚。
1条评分鲜花+2
小旦 鲜花 +2 灰常感谢! 2013-03-13
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