缺氧缺血性脑毁伤是招致重生儿神经功用妨碍和智力低下的一个主要缘由，近年来炎性细胞因子的效果在HIBD的研讨中越来越遭到注重。研讨标明，中药川芎嗪具有抗炎效果，在临床上对缺氧缺血脑毁伤有维护效果。 IL?8、TNF?α是主要的促炎症因子，IL?10是主要的抑炎症因子，三者在HIBD外周血中转变有较多报道，但脑组织内的转变研讨尚少。本实行采用酶联免疫吸附测定法检测，使用川芎嗪医治Wistar重生大鼠HIBD后脑内炎症细胞因子IL?8、TNF?α、 IL?10动态转变，讨论川芎嗪在HIBD中的脑维护效果。
1 资料与办法
1.1 实行动物及分组 选用重生7日龄Wistar大鼠90只，体重（15±3.5）g，随机分为假手术对照组、HIBD组、川芎嗪医治组，每组30只。每组再随机分为分0、6、12、24、48 h五个工夫点组，每工夫点组6只。
1.2 动物模子制备 参照Rice等法。乙醚麻醉，取仰卧位，颈前正中切断，别离并结扎右侧颈总动脉，缝合皮肤。半小时后放入缺氧瓶中，通8%O2/92%N2混和气体2 h，温度（36.5±0.5）℃。模子成功后将实行大鼠再随机分为HIBD组、川芎嗪组。假手术对照组（以下称对照组）别离右侧颈总动脉，不结扎。川芎嗪组按30 mg/kg剂量腹腔打针川芎嗪，HIBD组给响应量心理盐水。模子完成后即刻、12 h各打针1次，此时开端计时，工夫点为0 h。
1.3 首要仪器和药品 高速低温离心计（德国 Heraeus公司），全主动酶标仪 （美国 Multiskan M.S），盐酸川芎嗪打针液（北京永康药业有限公司，产物批号041213），原装进口大鼠IL?8 ELISA试剂盒（美国 Rapidbio公司），原装进口大鼠TNF?α、IL?10 ELISA试剂盒（美国Biosource公司）。
1.4 取材及标本检测 各组辨别于0、6、12、24、48 h，左心室心理盐水灌注冲刷，取右脑称重，液氮保管。标本与心理盐水1∶2（w/v），匀浆，4 ℃离心12 000 r/min,15 min，取上清，每管均匀分为三份。ELISA法检测IL?8、 TNF?α、IL?10浓度，参照仿单步调操作。
1.5 计算剖析 采用SAS计算软件包处置。对实行组与对照组之间的效应差别使用方差剖析和t查验进行计算比拟。以α=0.05作为判别差别明显性的规范。
2 后果
2.1 分组状况 本实行动物随机分组，各组体重组间比拟无分明差异（P>0.05），方差齐。各工夫点IL?8的浓度HIBD组中最高，川芎嗪医治后降低，对照组最低。HIBD组和川芎嗪组IL?8浓度随工夫延伸均逐步上升，24 h到达顶峰后开端回落。经t查验标明各工夫点HIBD组与对照组间IL?8的浓度转变均有分明的计算学意义（P<0.01）。HIBD组和川芎嗪组IL?8浓度在各个工夫点P＜0.01，0 h时t值最大，t=7.02。详见表1。
表1 大鼠脑匀浆IL?8含量动态转变
2.2 各工夫点TNF?α浓度比拟 川芎嗪组低于HIBD组，对照组最低。经t查验标明各工夫点HIBD组与对照组间TNF?α的浓度比拟，转变均有计算学意义（P<0?01）。HIBD组和川芎嗪组TNF?α浓度随工夫延伸逐步上升，12 h时均达最高值后回落。两组TNF?α浓度转变的比拟在0 h时P=0?103,其他各工夫点P＜0?01。24 h时t值最大，t=28?04。详见表2。
表2 大鼠脑匀浆TNF?α含量动态转变比拟
2.3 各工夫点IL?10浓度比拟 HIBD组较对照组分明升高，川芎嗪医治后降低。随工夫延伸三组IL?10浓度逐步上升。t查验标明HIBD组与对照组间IL?10的浓度转变在各工夫点均有分明的计算学意义（P<0?01）；川芎嗪组同HIBD比拟各工夫点IL?10的浓度转变均有分明的计算学意义（P<0?01）。6 h时t值最大，t=11?37。详见表3。
表3 大鼠脑匀浆IL?10含量动态转变比拟
3 评论
研讨以为，缺氧缺血性脑毁伤中能量代谢妨碍、兴奋性氨基酸毒性、自在基的毁伤、钙超载、细胞凋亡及互相影响在其病理转变进程中起主要效果，炎性因子效果在HIBD中的研讨也逐步成为热点。脑缺血后可发生炎症反响〔3〕，细胞因子表达加强。近年来发现，川芎嗪医治脑缺血性疾病有优越疗效。IL?8首要由单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞等发生，是最强的中性粒细胞趋化因子。作为致炎因子，它的旌旗灯号传递由靶细胞膜上与G卵白耦联的IL?8受体介导。缺氧缺血早期因为能量代谢妨碍，脑细胞无氧呼吸添加，神经元和星形胶质细胞等释扩大量兴奋性氨基酸，发生毒性效果，使钙离子内流，细胞内钙超载，最终招致氧自在基很多释放，激活其他炎性因子释放，如IL?1β、TNF?α、LPS，诱导IL?8 发生添加。IL?8表达部位首要在血管内皮细胞和脑胶质细胞，HIBD后白细胞浸润数目随IL?8浓度上升而增多〔5〕。临床研讨发现，缺氧缺血脑病（HIE）患儿血浆中IL?8程度发病1 d后升高，可继续7 d以上。HIE患儿脑脊液中IL?8程度分明高于对照组，和HIE病情轻重水平正相关。本实行后果显示HIBD组和川芎嗪组脑内IL?8浓度随工夫延伸逐步上升，24 h到达最顶峰后开端回落。HIBD组IL?8浓度比对照组升高超显，各工夫点转变有计算学意义（P<0?01）。川芎嗪医治后IL?8浓度较HIBD组下降，各工夫点转变有计算学意义（P<0?01）。12 h时转变最分明，标明IL?8参加了HIBD病理进程，川芎嗪可降低IL?8浓度。Bacon以为钙通道阻滞剂可以按捺IL?8受体介导的旌旗灯号传递，按捺IL?8的效果。川芎嗪作为一种钙通道拮抗剂对立细胞内钙超载，按捺IL?8受体介导的旌旗灯号传递，然后按捺IL?8招致的炎症毁伤，在HIBD中起脑维护效果。缺氧缺血早期能量代谢妨碍，脑细胞无氧呼吸添加，胶质细胞、神经元、血管内皮细胞以及浸润的巨噬细胞都可排泄TNF?α。TNF?α作为主要的炎症细胞因子，是一种由活化的单核?巨噬细胞排泄的促炎症因子，过度表达有分明的细胞毒性效果。研讨标明HIE患儿生后3 d内血清TNF?α明显增高。
局灶性脑缺血再灌注后TNF?α浓度上升，川芎嗪可减轻TNF?α加剧的脑缺血再灌注毁伤。本实行后果显示TNF?α在HIBD后表达较假手术对照组分明上升，12 h到达顶峰后逐步回落，48 h仍高于对照组。各个工夫点HIBD组与对照组组间比拟均有分明差别（P<0?01）。川芎嗪医治组各响应工夫点TNF?α浓度较HIBD组降低，各工夫点两组比拟除0 h时没有分明的医治效果外（P=0?103），其他工夫点均有P＜0?01，以48 h最为分明。HIBD后川芎嗪按捺脑组织表达TNF?α，减轻脑组织毁伤水平，在HIBD中起脑维护效果。研讨证明IL?10 可以按捺白细胞和小胶质细胞排泄IL?1、IL?6和TNF?α，按捺白细胞堆积和趋化因子的发生，减轻缺氧缺血后的迟发毁伤，具有脑维护效果。IL?10可以按捺Th1细胞发育然后削减促炎症细胞因子排泄，按捺炎症进程中抗原提呈、炎性细胞激活，降低细胞因子的组成及细胞因子受体的活性和表达，发扬较强的抗炎效果。大鼠脑缺血后打针IL?10， 24 h后发现脑梗死局限明显小于对照组。腹腔打针IL?10多克隆抗体，可进步大脑皮层c?fos含量，促进凋亡，加剧毁伤水平。本实行各组IL?10浓度从0 h到48 h不断上升， HIBD组IL?10 的含量高于对照组，各工夫点比拟有明显性差别（P<0?01）。川芎嗪医治后浓度较HIBD组降低，各工夫点两组比拟有明显性差别（P<0?01）。以6 h时差异最分明。缺氧缺血时神经系统的维护反响、应激反响以及免疫调理等综合病理进程招致HIBD后IL?10 的添加。川芎嗪改善脑内微轮回、抗脂质氧化、减轻钙超载等，使脑内炎症 、神经系统的应激和免疫调理减轻，然后降低IL?10浓度。本实行后果标明，HIBD后重生大鼠炎症细胞因子IL?8、TNF?α、IL?10的浓度均升高，川芎嗪医治后降低，然后减轻缺氧缺血性脑毁伤后脑内炎症水平，起到脑维护的效果。
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