紧急求助：RT-PCR引物设计的问题 [复制链接]

各位前辈，我正在做关于ATP敏感性内向整流型钾离子通道方面的研究，需要用RT-PCR测Kir6.2的mRNA表达，实验动物是狝猴，在PUBMED里找Kir6.2只有兔和牛蛙的，另外有狝猴的许多其他的，诸如Potassium channel subfamily K member 6 (Inward rectifying potassium channel protein TWIK-2) (TWIK-originated similarity sequence), transcript variant 2 ，请问这个是不是？是不是表达方式不同？
另外，实在不行用兔子的序列行不行，连人的都没找到。
老板一个劲的催，急死了。谢谢各位大侠帮忙了。
已在丁香园发过了，还没回音，希望咱们学校的高手们看到这里一定拉兄弟一把。

这个看同源性有多高了，狝猴Kir6.2是不是现在还没有没有基因序列？

记得一个大哥曾经碰到过这个情况，记得他是用同源性的其它动物的该基因来代替的，具体不清楚，如果设计引物的时候在保守区，两个动物的序列应该一样。
PS：RT-PCR是半定量，既然采用实狝猴如此贵的动物，为什么不采取更精确的real－time PCR呢，呵呵

对 potassium channel 研究的不多。看下面的序列是不是你需要的？

XM_001110488
Macaca mulatta similar to Potassium voltage-gated channel subfamily G member 2 (Voltage-gated potassium channel subunit Kv6.2) (Cardiac potassium channel subunit) (LOC718167), mRNA

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Please see the attachment for the details Kv 6.2.rar (2 K) 下载次数:5   Kv 6.2.rar (2 K) 下载次数:5

lz 应该把 real time -PCR简写为 RT- PCR,不过现在realtime 一般不简化，以免和 reverse transcription 混淆， 或者称为 quantitive PCR。gene expression 一般可以找到对应的种属基因，否则一次成功还好，不然 troubleshooting 相当麻烦

引用第2楼霍普金斯于2008-03-06 00:02发表的  :记得一个大哥曾经碰到过这个情况，记得他是用同源性的其它动物的该基因来代替的，具体不清楚，如果设计引物的时候在保守区，两个动物的序列应该一样。PS：RT-PCR是半定量，既然采用实狝猴如此贵的动物，为什么不采取更精确的real－time PCR呢，呵呵

real time -PCR简写为 RT- PCR还没听说过， 大家都是约定俗成的是reverse transcription
做试验就是一步一步折腾啊